一、新特性主要表現(xiàn)

(1)從2021年10月開始，東北、華北等北方平原地區(qū)，新發(fā)生疫情的母豬場急速增多;發(fā)病豬群的臨床癥狀輕微，檢測的陽性樣品Ct值較高。

(2)采用原來的凈化處置方法，凈化陽性場所需時間**變長。陽性場處置轉(zhuǎn)陰之后，經(jīng)過15-25天，又會轉(zhuǎn)陽，甚至多次反復(fù)。

(3)有的場沒發(fā)現(xiàn)異常豬，就莫名檢測到ASFV核酸陽性。有輕微臨床癥狀的豬樣本，檢測發(fā)現(xiàn)病毒含量很高，Ct值可低至24。確診發(fā)現(xiàn)是野毒!

(4)檢測發(fā)現(xiàn)Ct值在25左右，很多豬沒有癥狀，也沒有死亡。低Ct值豬只，剔除后多天仍未見死亡。

(5)在**檢出陽性1周后，豬舍灰塵中經(jīng)常檢出病毒核酸。

針對以上非洲豬瘟出現(xiàn)新的問題，閆老師從非洲豬瘟的病原學(xué)特點、變異情況、感染方式、臨床癥狀、檢測手段等方面提出一些疑問，并從實驗研究數(shù)據(jù)和田間觀察到的一些數(shù)據(jù)及分析中，得出了一些結(jié)論。

二、新流行非瘟**問題及分析

1、是否存在低劑量感染造成輕微癥狀，異常豬難以發(fā)現(xiàn)?

非洲豬瘟的典型癥狀必須依靠對陰性豬進(jìn)行攻毒試驗來觀察確定，攻毒后癥狀包括厭食、發(fā)熱、躺臥、皮膚出血/紫紺、關(guān)節(jié)腫脹、呼吸困難、腹瀉/血便等。在生產(chǎn)和臨床上，每次出現(xiàn)的癥狀會有差異。

對陰性豬的攻毒實驗觀察結(jié)果顯示：不同攻毒劑量下，病毒血癥開始出現(xiàn)的時間即是臨床癥狀出現(xiàn)的時間節(jié)點;攻毒劑量不影響病毒血癥出現(xiàn)的時間和臨床癥狀出現(xiàn)的時間。病毒血癥與發(fā)燒等臨床癥狀同時出現(xiàn)。

2、生產(chǎn)條件下“檢測+清除”，是否會導(dǎo)致大量不間斷的交叉污染?

這個疑慮從之前的“全面檢測+清除”的經(jīng)驗來看，可以打消，因為并未造成大面積的豬群感染及規(guī)模縮減。迅速全檢風(fēng)險很小，不會造成大的污染。非洲豬瘟在群內(nèi)傳播很慢，個別豬感染后，在群內(nèi)往往只感染臨近豬。如果只采樣檢測異常豬不能完全消除傳染源。在7天潛伏期內(nèi)，再次檢測基本可消除隱形感染豬。

補充一下個人觀點，在異常場線全面采樣的操作細(xì)節(jié)中，也有一些值得注意的事項。口鼻拭子個體采樣，需要逐頭更換工具及手套，采完一頭消毒后再采下一頭。避免做保定豬只采血等容易造成交叉污染的操作，可以采用尾根采血的方式。

3、是否ASF病毒出現(xiàn)了很大變化?

ASFV全基因組長度約170-193 kbp，基因組中段為125kb的保守段，其中就有編碼P72蛋白的B646L基因。P72、P54、P30蛋白均與病毒侵入細(xì)胞有關(guān)。基因組兩端為多變的多基因家族(MGF)，MGF區(qū)的突變、缺失是病毒毒力致弱的基礎(chǔ)。CD2v是由EP402R決定的44個氨基酸，CD2v與宿主CD2v相似，與紅細(xì)胞吸附感染細(xì)胞有關(guān)。

基于高通量基因組測定新技術(shù)，對非洲豬瘟病毒的毒株流行情況，有了新的認(rèn)識。2021年10月**檢出野毒的田間自然變異株，有些毒株的毒力****。存在著高毒力野毒和自然變異弱毒并存的現(xiàn)象。在難以處理的豬場陽性生產(chǎn)線，ASFV毒株存在**的MGF段的大段缺失+多處基因突變。

根據(jù)張桂紅研究室/國家ASF南方中心的接樣檢測數(shù)據(jù)發(fā)現(xiàn)，傳統(tǒng)野毒、人為基因缺失毒株、自然缺失毒株、嵌合毒株都有檢出。由于自然變異/缺失株的出現(xiàn)，通過傳統(tǒng)的鑒別檢測試劑盒來排除野毒或疫苗毒株、以及進(jìn)行分型(I/II)的方法，已經(jīng)沒有意義。

同時，可以認(rèn)識到：

(1)自然缺失毒力大為減弱，感染豬臨床無異常;

(2)“常規(guī)的異常豬”檢測手段，難以及時發(fā)現(xiàn)豬群已經(jīng)感染。

(3)僅僅剔除異常豬不能**及時凈化。

4、是否采樣方法/樣品不對，導(dǎo)致難以發(fā)現(xiàn)抗原陽性豬?

通過弱毒場線欄位表面環(huán)境采樣與血清采樣的檢測結(jié)果比較發(fā)現(xiàn)，弱毒場線欄位表面環(huán)境檢測特異性高，敏感性低(陰性相符的特異性為95%，陽性相符的敏感性為25%)。為**弱毒檢出率，采用兩次全群采血間篩查，可**判斷豬只是否處于陰性狀態(tài)。血樣仍是最適合的檢測樣本。

5、是否感染豬存在間歇性散毒，導(dǎo)致陽性豬有時成了陰性?

臨床檢測數(shù)據(jù)發(fā)現(xiàn)：

(1)弱毒感染豬血清持續(xù)陽性，但鼻拭子、肛拭子和咽拭子出現(xiàn)間歇性排毒情況，可以說明豬只是陽性但是咽拭子檢測不到。

(2)同居豬的血清檢出率較低，但是鼻拭子、咽拭子與攻毒豬也出現(xiàn)同樣的病毒檢出時間雙峰，其原因可能是感染豬排毒時同居豬在攝入病毒。

弱毒的臨床癥狀非常輕微，幾乎所有樣品中都存在間歇性排毒。單一樣品、一次全檢不一定能檢出，因為每次全群檢測時陽性豬不一定正在散毒。發(fā)現(xiàn)弱毒感染的場線，**采樣**“咽拭子+血液”雙來源，同時一個潛伏期內(nèi)檢測2次。

傳統(tǒng)野毒與多毒力基因缺失的野毒株的感染，處置方法完全不同。發(fā)現(xiàn)陽性感染后，應(yīng)盡快鑒定毒株類型，可**節(jié)約檢測與清除的資源，決定凈化效果。

6、其他國家的是否也發(fā)現(xiàn)弱毒株?有基因變異嗎?什么特點?

其他國家也有報道發(fā)現(xiàn)ASFV弱毒株，在波羅的海地區(qū)的愛沙尼亞，發(fā)現(xiàn)的弱毒株，其5’端MGF區(qū)存在缺失，3’端存在反轉(zhuǎn)。使用發(fā)現(xiàn)的弱毒株，攻毒12頭小型豬，5頭家豬，5頭野豬。結(jié)果，75%的小型豬和所有家豬均在出現(xiàn)急性癥狀后，存活了。但是所有野豬17天內(nèi)陸續(xù)死亡。

弱毒株攻毒后，檢測口咽拭子、肛拭子qPCR陽性出現(xiàn)的時間晚，持續(xù)時間短。

也有研究報道，在格魯吉亞出現(xiàn)了新的、低毒力的毒株，這使得被動檢測發(fā)現(xiàn)感染豬，變得更加困難。

三、總結(jié)

(1)2021年下半年開始，已發(fā)現(xiàn)多種非洲豬瘟田間毒株的基因組中，毒力基因出現(xiàn)多處缺失，致病性已經(jīng)變異、變?nèi)酰揽匦蝿菡诎l(fā)生重大變化。不再是“高致死力野毒+人工缺失弱毒”并列，而是已經(jīng)出現(xiàn)多種、多基因自然缺失的弱毒株，高致死力的野毒已經(jīng)不再常見。

(2)**受控試驗和在我國的田間觀察均發(fā)現(xiàn)，無論是強野毒、人工(單/雙/多)缺失弱毒，還是自然大段缺失的弱毒，豬群均無法與之共存。弱毒感染豬，經(jīng)過更長時間，均會出現(xiàn)嚴(yán)重的ASFV發(fā)病癥狀。

(3)通過“全群檢測+精準(zhǔn)清除”，均有成功凈化的范例。“全群檢測+精準(zhǔn)清除”成功的關(guān)鍵是，確診后24h內(nèi)完成全群檢測+離群。每晚一天都會付出超大代價。

(4)需盡快改進(jìn)的方法：①盡早發(fā)現(xiàn)感染的**方法;②**全群檢測的方法;③**無污染將感染豬/接觸豬隔離或離群的方法。

(5)中期看，**預(yù)防、控制ASF，仍將是養(yǎng)豬業(yè)盈虧/存亡的不二法門。(作者：閆之春)